英文(wen)名(ming)稱(cheng)：Human HO ELISA Kit

　　實(shi)驗(yan)類(lei)型(xing)：夾(jia)心法

　　檢測範圍：31.25 ng/ml - 1000 ng/ml

　　測限：1 ng/ml

　　應用範(fan)圍：血(xue)清(qing)、血(xue)漿、組織勻漿、細胞培(pei)養(yang)物(wu)上清(qing)或(huo)其它相關液(ye)體(ti)(本產品(pin)僅(jin)供(gong)實(shi)驗(yan)室(shi)科研及(ji)非臨床用(yong)途(tu))

　　人血(xue)紅素加(jia)氧酶(HO)ELISA試劑(ji)盒僅(jin)供(gong)研究(jiu)使(shi)用(yong)

　　人血(xue)紅素加(jia)氧酶(HO)ELISA試劑(ji)盒實(shi)驗(yan)目的(de)

　　本試劑(ji)盒用(yong)於(yu)體外定量(liang)檢測血(xue)清(qing)、血(xue)漿、組織、細胞上(shang)清(qing)及相關液(ye)體(ti)樣本中人(ren)血(xue)紅素加(jia)氧酶(HO)的(de)含量(liang)。

　　有效期(qi)：6個(ge)月

　　保存條件(jian)：2-8℃

　　實(shi)驗(yan)原(yuan)理(li)

　　試(shi)劑盒采用雙(shuang)抗體(ti)壹(yi)步夾(jia)心法酶聯(lian)免疫(yi)吸(xi)附(fu)試驗(ELISA)。往(wang)預先包被(bei)人血(xue)紅素加(jia)氧酶(HO)捕(bu)獲抗(kang)體(ti)的(de)包被(bei)微孔中，依次(ci)加入(ru)標(biao)本、標(biao)準品、HRP標(biao)記的(de)檢測抗體，經過(guo)溫(wen)育並(bing)洗(xi)滌(di)。用(yong)底物(wu)TMB顯色(se)，TMB在過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶的(de)催化(hua)下轉(zhuan)化(hua)成藍(lan)色(se)，並在(zai)酸(suan)的(de)作用(yong)下轉(zhuan)化(hua)成最終(zhong)的(de)黃(huang)色(se)。顏色(se)的(de)深淺(qian)和樣品中的(de)人血(xue)紅素加(jia)氧酶(HO)呈正(zheng)相關。用(yong)酶標(biao)儀(yi)在(zai)450nm  波長下測定吸光度(OD 值(zhi))，計算樣品(pin)濃(nong)度。

　　人(ren)血(xue)紅素加(jia)氧酶(HO)ELISA試劑(ji)盒組(zu)成

　　試劑(ji)盒組(zu)成96孔配(pei)置48孔(kong)配(pei)置備(bei)註(zhu)

　　微孔酶標(biao)板8孔(kong)×12條8孔×6條 無

　　標(biao)準品0.3mL×6管0.3mL×6管無

　　樣(yang)本稀釋(shi)液(ye)6mL3mL無

　　檢測抗體-HRP10mL5mL無

　　20×洗(xi)滌(di)緩(huan)沖液25mL15mL按說(shuo)明(ming)書(shu)進行(xing)稀釋(shi)

　　底(di)物(wu)A6mL3mL無

　　底(di)物(wu)B6mL3mL無

　　終(zhong)止(zhi)液(ye)6mL3mL無(wu)

　　封(feng)板(ban)膜2張(zhang)2張(zhang)無(wu)

　　說(shuo)明(ming)書(shu)1份1份無

　　自(zi)封袋1個1個無

　　備註(zhu)：

　　1. 標(biao)準品濃度依(yi)次(ci)為：1000、500、250、125、62.5、0 ng/ml

　　2.  經(jing)過大量(liang)正常(chang)標(biao)本檢驗(yan)，標(biao)本的(de)正常(chang)濃度值(zhi)均在(zai)試(shi)劑(ji)盒提(ti)供(gong)的(de)檢測範圍內(nei)，實(shi)驗(yan)過(guo)程中直(zhi)接取50μL樣(yang)本上樣(yang)即(ji)可。當(dang)有部分(fen)樣本值超過(guo)標(biao)準品濃度時(shi)，可用(yong)樣本稀釋(shi)液(ye)將(jiang)標(biao)本進行(xing)適當(dang)稀釋(shi)後(hou)再(zai)進行(xing)實(shi)驗(yan)。

　　樣(yang)本處(chu)理(li)及(ji)要(yao)求

　　1.  血(xue)清(qing)：全血(xue)標(biao)本請於(yu)室(shi)溫放置(zhi)2小(xiao)時或(huo)4℃過夜(ye)後(hou)於(yu)1000g離心20分(fen)鐘(zhong)，取上(shang)清(qing)即(ji)可檢測，或(huo)將(jiang)標(biao)本放於(yu)-20℃或(huo)-80℃保存，但應避(bi)免(mian)反(fan)復凍(dong)融。

　　2. 血(xue)漿：可用(yong)EDTA或(huo)肝素作為(wei)抗凝劑(ji)，標(biao)本采集後(hou)30分(fen)鐘(zhong)內(nei)於(yu)2 - 8°C  1000g離心20分(fen)鐘(zhong)，或(huo)將(jiang)標(biao)本放於(yu)-20℃或(huo)-80℃保存，但應避(bi)免(mian)反(fan)復凍(dong)融。

　　3. 細胞培(pei)養(yang)物(wu)上清(qing)或(huo)其它生物(wu)標(biao)本：1000g離心20分(fen)鐘(zhong)，取上(shang)清(qing)即(ji)可檢測，或(huo)將(jiang)標(biao)本放於(yu)-20℃或(huo)-80℃保存，但應避(bi)免(mian)反(fan)復凍(dong)融。

　　註(zhu)：標(biao)本溶(rong)血(xue)會(hui)影響檢測結(jie)果(guo)，因(yin)此溶(rong)血(xue)標(biao)本不宜(yi)進行(xing)此項檢測。

　　需要(yao)而未(wei)提(ti)供(gong)的(de)試劑(ji)和器材

　　1. 酶標(biao)儀(yi)(450nm)

　　2. 高(gao)精(jing)度加(jia)樣器(qi)及(ji)槍頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

　　3. 37℃恒溫(wen)箱(xiang)

　　4. 蒸餾水或(huo)去離子水

　　試(shi)劑(ji)準備

　　試劑盒從(cong)冷(leng)藏(zang)環(huan)境(jing)中取出應在室(shi)溫平(ping)衡後方(fang)可使(shi)用(yong)。

　　20×洗滌(di)緩(huan)沖液的(de)稀釋(shi)：蒸(zheng)餾水按(an)1：20稀釋(shi)，即(ji)1份20×洗滌(di)緩(huan)沖液加19份(fen)蒸(zheng)餾水。

　　操(cao)作步(bu)驟

　　1. 從(cong)室(shi)溫(wen)平(ping)衡20min後的(de)鋁箔袋(dai)中取出所需(xu)板(ban)條(tiao)，剩余板條(tiao)用自封(feng)袋(dai)密封放(fang)回(hui)4℃。

　　2. 設置(zhi)標(biao)準品孔和樣本孔，標(biao)準品孔各加不(bu)同(tong)濃度的(de)標(biao)準品50μL;

　　3. 樣本孔中(zhong)加(jia)入(ru)待(dai)測樣本50μL;空(kong)白(bai)孔不(bu)加(jia)。

　　4.  除空(kong)白(bai)孔外(wai)，標(biao)準品孔和樣本孔中(zhong)每(mei)孔加入(ru)辣根過(guo)氧(yang)化物(wu)酶(HRP)標(biao)記的(de)檢測抗體100μL，用封(feng)板(ban)膜封(feng)住(zhu)反(fan)應孔，37℃水(shui)浴鍋(guo)或(huo)恒溫(wen)箱(xiang)溫育60min。

　　5. 棄(qi)去液(ye)體(ti)，吸(xi)水紙(zhi)上拍(pai)幹，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌(di)液(ye)(350μL)，靜置1min，甩去洗滌(di)液(ye)，吸水紙(zhi)上拍(pai)幹，如(ru)此重復洗(xi)板(ban)5次(ci)(也可用(yong)洗板機(ji)洗板(ban))。

　　6. 每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)底(di)物(wu)A、B各50μL，37℃避(bi)光孵(fu)育15min。

　　7. 每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)終(zhong)止(zhi)液(ye)50μL，15min內(nei)，在(zai)450nm波長處(chu)測定各孔的(de)OD值。

　　人(ren)血(xue)紅素加(jia)氧酶(HO)ELISA試劑(ji)盒註(zhu)意事項

　　1. 嚴格(ge)按照(zhao)規定的(de)時間和(he)溫(wen)度進行(xing)溫育(yu)以準確結(jie)果(guo)。所有(you)試(shi)劑(ji)都(dou)必須(xu)在使(shi)用(yong)前達(da)到室溫(wen)20-25℃。使(shi)用(yong)後立即(ji)冷藏保存試劑(ji)。

　　2. 洗(xi)板不正(zheng)確(que)可以導(dao)致(zhi)不準確的(de)結(jie)果(guo)。在加(jia)入(ru)底(di)物(wu)前確(que)保盡量(liang)吸幹孔內(nei)液(ye)體(ti)。溫育過(guo)程中不要(yao)讓微(wei)孔(kong)幹燥掉(diao)。

　　3. 消(xiao)除板(ban)底(di)殘(can)留(liu)的(de)液體(ti)和手指(zhi)印，否則(ze)影響OD值(zhi)。

　　4. 底(di)物(wu)顯色(se)液應呈無(wu)色(se)或(huo)很(hen)淺的(de)顏色(se)，已經(jing)變(bian)藍(lan)的(de)底物(wu)液不(bu)能(neng)使(shi)用(yong)。

　　5. 避(bi)免(mian)試(shi)劑和(he)標(biao)本的(de)交叉(cha)汙(wu)染(ran)以免(mian)造成錯誤結(jie)果(guo)。

　　6. 在儲(chu)存和溫(wen)育(yu)時避(bi)免(mian)強(qiang)光直(zhi)接照射(she)。

　　7. 平(ping)衡至室(shi)溫後(hou)再(zai)打(da)開(kai)密封袋以防(fang)水滴(di)凝聚(ju)在(zai)冷板條上(shang)。

　　8. 任何反(fan)應試劑(ji)不能(neng)接觸(chu)漂(piao)白(bai)溶(rong)劑(ji)或(huo)漂白(bai)溶(rong)劑(ji)所散發的(de)強烈(lie)氣體(ti)。任何漂白(bai)成分(fen)都(dou)會(hui)破(po)壞(huai)試(shi)劑(ji)盒中(zhong)反(fan)應試劑(ji)的(de)生物(wu)活性(xing)。

　　9. 不能(neng)使(shi)用(yong)過期(qi)產(chan)品(pin)。

　　10. 如(ru)果(guo)可能(neng)傳(chuan)播(bo)疾病(bing)，所有(you)的(de)樣品(pin)都(dou)應管理(li)好，按(an)照(zhao)規定的(de)程序處(chu)理(li)樣(yang)品(pin)和檢測裝置。

　　洗板(ban)方(fang)法

　　手工洗(xi)板(ban)方法：吸(xi)去(不(bu)可觸(chu)及(ji)板(ban)壁)或(huo)甩掉酶標(biao)板內(nei)的(de)液體(ti);在實(shi)驗(yan)臺(tai)上(shang)鋪(pu)墊幾(ji)層(ceng)吸(xi)水(shui)紙(zhi)，酶標(biao)板朝(chao)下用(yong)力(li)拍(pai)幾(ji)次(ci);將(jiang)30(48T的(de)20倍)倍濃縮(suo)洗滌(di)液(ye)用蒸餾水30(48T的(de)20倍)倍稀釋(shi)後(hou)備用(yong)。根據(ju)需(xu)要(yao)，重復此過程數次(ci)。

　　自動(dong)洗板：如(ru)果(guo)有自(zi)動(dong)洗(xi)板機，應在熟(shu)練使(shi)用(yong)後再(zai)用(yong)到正式實(shi)驗(yan)過(guo)程中。

　　人血(xue)紅素加(jia)氧酶(HO)ELISA試劑(ji)盒實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)計算

　　以所測標(biao)準品的(de)OD值為(wei)橫(heng)坐(zuo)標(biao)，標(biao)準品的(de)濃度值(zhi)為縱(zong)坐(zuo)標(biao)，在坐(zuo)標(biao)紙(zhi)上或(huo)用相關軟(ruan)件(jian)繪制標(biao)準曲線(xian)，並得到直(zhi)線回(hui)歸(gui)方程，將(jiang)樣品(pin)的(de)OD值代(dai)入(ru)方(fang)程，計算出樣(yang)品(pin)的(de)濃度。

　　(此圖(tu)僅供(gong)參考)

　　人血(xue)紅素加(jia)氧酶(HO)ELISA試劑(ji)盒性(xing)能(neng)

　　1. 檢測範圍：31.25 ng/ml - 1000 ng/ml

　　2. 靈(ling)敏度：檢測濃度小(xiao)於1 ng/ml

　　3. 特異性(xing)：不與(yu)其(qi)它可溶(rong)性(xing)結(jie)構類似物(wu)交叉(cha)反(fan)應。

　　4. 重復性(xing)：板內(nei)變(bian)異系(xi)數(shu)小(xiao)於10% ，板(ban)間變(bian)異系(xi)數(shu)小(xiao)於15% 。