標簽(qian)：熒(ying)光(guang)定(ding)量 PCR 耗 本生生物 實驗(yan)耗材 96 孔 PCR 孔(kong)板
　　

　　熒(ying)光(guang)定(ding)量 PCR 耗材如何(he)使(shi)用及(ji)選(xuan)擇註(zhu)意(yi)事項 ！

本(ben)生生物詳(xiang)解(jie)：高通(tong)量的 96 孔 PCR 板和(he) 8 聯(lian)管(guan)是(shi)在聚合(he)酶鏈式反應 (Polymerase Chain Reaction ,PCR) 中(zhong)，主(zhu)要作為(wei)參與(yu)擴(kuo)增(zeng)反應的引物、Taq DNA 聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、緩沖液等的(de)承載(zai)物。醫療(liao)級(ji)聚(ju)丙(bing)烯 (PP) 材質因(yin)其(qi)的純(chun)凈度(du)和(he)穩定(ding)性(xing)，能(neng)更(geng)好(hao)適應 PCR 反應過程(cheng)中(zhong)反復(fu)高低(di)溫設(she)定(ding)，並(bing)且能(neng)夠(gou)實(shi)現高溫(wen)高壓(ya)滅(mie)菌(jun)操(cao)作，常常被用於(yu) PCR 耗材的生產(chan)。隨(sui)著(zhe)熒(ying)光(guang)定(ding)量 PCR 技術的(de)普及(ji)，該技術被(bei)廣(guang)泛用於(yu)遺(yi)傳(chuan)、生化、免疫(yi)、醫藥(yao)等(deng)領(ling)域，不(bu)僅(jin)應用於(yu)基因(yin)分離、克(ke)隆(long)和(he)核(he)酸(suan)序列分析等基礎研(yan)究(jiu)，還(hai)可用於(yu)疾(ji)病的診(zhen)斷或任何(he)有 DNA，RNA 的(de)研(yan)究(jiu)領域(yu)。

如(ru)何(he)正(zheng)確使(shi)用 96 孔 PCR 孔板?

>PCR 板有透(tou)明和(he)乳白色可選(xuan)，其(qi)中(zhong)乳白色更(geng)適合(he)用於(yu)頂部采集(ji)熒(ying)光(guang)信號(hao)的新型熒(ying)光(guang)定(ding)量 PCR 儀 (如(ru)伯(bo)樂(le) CFX 系(xi)列，ABI 7500fast 以上型號(hao)， Roche 480 系列(lie))，但(dan)如(ru)果熒(ying)光(guang)定(ding)量 PCR 儀是(shi)底(di)部(bu)光(guang)源(yuan)的，則(ze)應選(xuan)擇透(tou)明的。

>PCR 板根(gen)據(ju)裙(qun)邊(bian)設(she)計(ji)又可分為(wei)無裙邊(bian)、半(ban)裙(qun)邊(bian)和(he)全(quan)裙(qun)邊(bian)三(san)種(zhong)設計模(mo)式(shi)，不(bu)同廠家(jia)的(de)熒(ying)光(guang)定(ding)量 PCR 儀會設計(ji)不(bu)同的切(qie)角或邊(bian)緣凸起(qi)，請(qing)選(xuan)擇適合(he)該 PCR 儀的(de)板子。

>PCR 板又分 100ul 體積(ji) (矮板) 和(he) 200ul 體積(ji) (高板)，根(gen)據(ju)機(ji)型的(de)不(bu)同選(xuan)擇，選(xuan)擇不(bu)同高度(du)孔(kong)板，避免高度(du)錯(cuo)誤對(dui)機(ji)器(qi)造成破壞(huai)和(he)加熱不(bu)均導致數據(ju)失真。

> 當(dang)使(shi)用 96 孔板做(zuo)熒(ying)光(guang)定(ding)量 PCR 實驗(yan)的(de)時候(hou)，推(tui)薦使(shi)用光學(xue)膜(mo)代來密封(feng)反應孔。正(zheng)確的封(feng)膜(mo)方法(fa)是(shi)：先(xian)沿(yan)著(zhe) 96 孔板的縱(zong)向(xiang)壓膜(mo)，然後橫(heng)向(xiang)，最後沿(yan)著(zhe)板的邊(bian)緣按壓使(shi)之(zhi)密封(feng)。具(ju)體手法(fa)見下(xia)面圖(tu)示(shi)。

加樣(yang)後會在管壁(bi)上飛(fei)濺(jian)壹些(xie)小(xiao)液滴(di)，另(ling)外反應體系內(nei)也(ye)會有壹些(xie)氣泡，需(xu)要離心去掉掛壁(bi)液滴(di)和(he)氣泡。請使(shi)用專用的微(wei)孔板離心機(ji)解(jie)決上述(shu)問題(ti)。

BUNSEN 本生 PCR 板屬(shu)於(yu)壹次(ci)性消耗品，生產(chan)壹次(ci)成型，不(bu)建議(yi)剪(jian)開(kai)使(shi)用容易造成實(shi)驗(yan)誤差(cha)增(zeng)加，不(bu)能(neng)清洗或部分重復利用。不(bu)要為(wei)了節(jie)省壹點小(xiao)錢(qian)，而給(gei)實驗(yan)帶(dai)來後續(xu)分析上的(de)困(kun)擾(rao)。

樣(yang)本量少，用 8 聯(lian)管(guan)做(zuo)實驗(yan)又該註(zhu)意(yi)哪(na)些(xie)呢?

>8 聯(lian)管(guan)也(ye)分乳白和(he)透(tou)明兩(liang)種(zhong)，選(xuan)擇方式和(he)孔(kong)板壹樣(yang)，根(gen)據(ju) PCR 儀的(de)熒(ying)光(guang)信號(hao)采集(ji)方式決(jue)定(ding)。

>8 聯(lian)管(guan)同樣(yang)也(ye)有 0.1 ml(矮管(guan)) 和(he) 0.2 ml(高管(guan))，根(gen)據(ju) PCR 儀的(de)加熱模(mo)塊(kuai)體積(ji)確定(ding)。

>BUNSEN 本(ben)生 8 聯(lian)管(guan)的(de)蓋(gai)子壹般(ban)有光(guang)學(xue)平(ping)蓋(gai)和(he)凸(tu)型圓(yuan)蓋之(zhi)分，光學(xue)平(ping)蓋(gai)適用於(yu)熒(ying)光(guang)定(ding)量 PCR，圓(yuan)蓋適用於(yu)普通(tong) PCR。

> 使(shi)用單管或 8 聯(lian)管(guan)做(zuo)實驗(yan)，並(bing)且樣(yang)本數量不(bu)多的時候(hou)，建議(yi)在樣(yang)品加熱塊(kuai) (TRAY) 上對(dui)稱(cheng)地(di)安(an)放(fang)樣(yang)品，最好(hao)是(shi)縱(zong)向(xiang)放置(zhi)，並(bing)且優先(xian)放(fang)在第 6 列(lie)或第 7 列(lie)，然(ran)後逐(zhu)漸(jian)向(xiang)兩(liang)邊(bian)放(fang)置(zhi)。這樣(yang)做(zuo)的好(hao)處(chu)是(shi)熱蓋(gai)壓下(xia)來的時候(hou)不(bu)至於(yu)發(fa)生傾斜(xie)，各個(ge)反應管的受力(li)和(he)受熱都(dou)比較(jiao)均勻，提高孔(kong)與(yu)孔(kong)之(zhi)間的數據(ju)精(jing)密(mi)性。也(ye)可以在加熱模(mo)塊(kuai)四(si)角的(de)位(wei)置，放(fang)置(zhi) 4 個(ge)單管(guan)平衡(heng)熱蓋(gai)壓力(li)，避免擴(kuo)增(zeng)少(shao)量樣(yang)本時出(chu)現(xian)管子變(bian)形的情況(kuang)。

> 管(guan)蓋沒(mei)有蓋(gai)好(hao)造成 PCR 反應液熱蒸發，影(ying)響(xiang)反應溫度的準(zhun)確控制(zhi)及(ji)反應也(ye)各成份(fen)的濃(nong)度(du)，同時也(ye)成為(wei)壹個(ge)汙(wu)染(ran)源。不(bu)但會因(yin)壓(ya)蓋時由(you)於(yu)粗(cu)心或者用力不(bu)均致使(shi)部(bu)分蓋子變(bian)形，而且還(hai)會造成樣(yang)品的交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)，所以我(wo)們推薦(jian)用獨(du)立管(guan)蓋(gai)的 8 聯(lian)管(guan)，每(mei)管(guan)蓋(gai)壹體，確保樣(yang)本獨(du)立反應，避免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。

BUNSEN 本生通用耗材：深(shen)孔(kong)板、96 孔矽(gui)膠(jiao)墊(dian)、吸頭、封(feng)板膜(mo)、玻(bo)片、試管(guan)、量杯、試劑(ji)槽(cao)、離心管(guan)、移(yi)液器等(deng)。

細胞(bao)培(pei)養(yang)類(lei)：血清瓶(ping)系列(lie)、細胞(bao)培(pei)養(yang)玻(bo)片、細胞(bao)鏟(chan)/刮(gua)/過(guo)濾(lv)器(qi)、移(yi)液管、細胞(bao)培(pei)養(yang)皿(min)/板/瓶、培養(yang)小(xiao)室(shi)。

核(he)酸(suan)提(ti)取(qu)耗材：移(yi)液器吸頭系列(lie)、深(shen)孔(kong)板及(ji)磁套(tao)系(xi)列、PCR 管/PCR 板系列、提取(qu)管。

試(shi)劑包裝(zhuang)類(lei)：廣口試劑瓶、窄(zhai)口試劑瓶、保(bao)存(cun)管(guan)、試(shi)劑(ji)盒、血清、蛋白、抗(kang)體/抗(kang)原(yuan)等(deng)。

病毒采(cai)樣(yang)：壹次(ci)性病毒取(qu)樣(yang)器/采樣(yang)器、唾液采集(ji)器等(deng)。