elisa實(shi)驗：常見問(wen)題(ti)及分析(xi)

　　ELISA實驗常見問(wen)題(ti)及分析(xi)

　　1. 背景(jing)顏(yan)色深(shen)/非特異性染(ran)色

　　原(yuan)因(yin)‌：洗滌(di)不(bu)充(chong)分(fen)、試劑汙(wu)染(ran)、孵育時間過(guo)長或(huo)抗(kang)體(ti)濃(nong)度過(guo)高‌。

　　解決方(fang)法(fa)‌：確保洗滌(di)液註滿微孔(kong)且(qie)無殘(can)留，更(geng)換(huan)吸頭避(bi)免交(jiao)叉汙(wu)染(ran)，嚴格(ge)按說(shuo)明(ming)書(shu)控(kong)制孵育和(he)顯色時間‌。

　　2. 所(suo)有孔(kong)均(jun)無(wu)明(ming)顯顏(yan)色

　　原(yuan)因(yin)‌：試劑混(hun)淆(xiao)、酶(mei)標物失(shi)活(huo)或(huo)步(bu)驟遺漏‌。

　　解(jie)決(jue)方(fang)法(fa)‌：檢查(zha)試劑標簽(qian)，確認(ren)無遺漏步(bu)驟，使用(yong)新鮮蒸(zheng)餾水(shui)配制(zhi)緩沖液，確保試劑室(shi)溫平(ping)衡(heng)30分鐘(zhong)‌。

　　3. 假(jia)陽性，背景(jing)高甚至花板(ban)

　　原(yuan)因(yin)‌：加樣時汙(wu)染(ran)、溫育箱溫度過(guo)高、操作時間過(guo)長導(dao)致反(fan)應時(shi)間不(bu)同(tong)、洗板(ban)不(bu)充(chong)分(fen)‌。

　　解(jie)決方(fang)法(fa)‌：更(geng)換(huan)槍(qiang)頭避(bi)免汙(wu)染(ran)，控(kong)制溫育箱溫度在(zai)37±0.5℃，在盡(jin)可(ke)能短的(de)時間內完(wan)成(cheng)操作(zuo)，避(bi)免堆(dui)積(ji)板(ban)子‌。

　　4. 重復性不(bu)好(hao)

　　原(yuan)因(yin)‌：加樣量(liang)不(bu)壹、操(cao)作時間不(bu)壹致(zhi)、操作人員(yuan)不(bu)同(tong)、標本處理不(bu)同(tong)‌。

　　解決方(fang)法(fa)‌：確保加樣量(liang)與時(shi)間壹致(zhi)，使用(yong)同(tong)壹名操(cao)作人員(yuan)，模擬相(xiang)同(tong)的(de)反應(ying)條(tiao)件‌。

　　5. 標準曲線(xian)不(bu)佳(jia)

　　可(ke)能原(yuan)因(yin)‌：倍比(bi)標準品時未(wei)充(chong)分(fen)混勻(yun)、標準品溶(rong)液配(pei)置(zhi)有誤(wu)或(huo)標準品已(yi)降(jiang)解‌。

　　解(jie)決(jue)方(fang)法(fa)‌：使用(yong)校準(zhun)過(guo)的(de)移液(ye)器，快速(su)、等量(liang)分配(pei)標準品，確認(ren)稀(xi)釋(shi)正(zheng)確(que)，並按推(tui)薦(jian)方(fang)式(shi)保存和(he)處(chu)理標準品‌。

　　6. 樣本(ben)無(wu)檢(jian)測信(xin)號

　　可(ke)能原(yuan)因(yin)‌：樣本中無檢測物(wu)或(huo)檢(jian)測(ce)物(wu)含量(liang)極(ji)低(di)、樣(yang)本(ben)中其他(ta)物(wu)質(zhi)影響/掩蓋(gai)檢測、樣(yang)本中檢測物濃(nong)度過(guo)高，Hook效應導(dao)致假(jia)低(di)值(zhi)‌。

　　解決方(fang)法(fa)‌：設置(zhi)內(nei)參(can)，重新實驗，對(dui)樣本(ben)進行(xing)適當稀(xi)釋(shi)，降(jiang)低(di)其(qi)他(ta)物(wu)質(zhi)的(de)幹擾‌。

　　7. 陰(yin)性對(dui)照出(chu)現陽性結果

　　可(ke)能原(yuan)因(yin)‌：試劑/樣(yang)品(pin)汙(wu)染(ran)、夾心ELISA-檢測(ce)抗(kang)體與(yu)包被抗(kang)體(ti)反(fan)應(ying)、酶(mei)標板(ban)洗板(ban)不(bu)凈‌。

　　解決(jue)方(fang)法(fa)‌：使用(yong)新鮮試劑，小(xiao)心操作(zuo)移(yi)液器(qi)，確定使用(yong)的(de)是正(zheng)確(que)的(de)包被(bei)抗體和(he)檢(jian)測抗體‌。

　　8. 酶(mei)標板(ban)整體(ti)背景(jing)高

　　可(ke)能原(yuan)因(yin)‌：結合反應太強或(huo)時(shi)間過(guo)長、底(di)物溶(rong)液或(huo)終(zhong)止(zhi)液(ye)不(bu)是(shi)新鮮配(pei)制(zhi)的(de)、沒有終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)‌。

　　解(jie)決方(fang)法(fa)‌：檢查(zha)底物的(de)稀釋(shi)，使用(yong)建議的(de)稀釋(shi)度，當酶(mei)標儀(yi)顯色足(zu)夠進行(xing)吸光度讀取(qu)是立即(ji)用(yong)終(zhong)止(zhi)液(ye)終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)‌。

　　9. 吸光度數(shu)值(zhi)低(di)

　　可(ke)能原(yuan)因(yin)‌：使用(yong)的(de)樣品(pin)中沒有顯示靶(ba)蛋(dan)白(bai)或(huo)者(zhe)靶(ba)蛋(dan)白(bai)顯示的(de)水平(ping)低(di)、抗(kang)體(ti)不(bu)足(zu)‌。

　　解(jie)決(jue)方(fang)法(fa)‌：檢查(zha)靶(ba)蛋(dan)白(bai)表達(da)系統(tong)，確保它在(zai)您的(de)樣品(pin)中被表達出(chu)來(lai)，確(que)定使用(yong)的(de)是建議的(de)抗體(ti)量(liang)‌。

　　10. 吸光值(zhi)高

　　可(ke)能原(yuan)因(yin)‌：樣品和(he)/或(huo)陽性對(dui)照吸光度數(shu)高，吸光度沒(mei)有按樣(yang)品(pin)在(zai)板(ban)上(shang)的(de)稀釋(shi)梯度遞(di)減‌。

　　解(jie)決方(fang)法(fa)‌：樣品(pin)或(huo)陽性對(dui)照的(de)濃度過(guo)高，超出了實驗方(fang)法(fa)檢測(ce)的(de)範(fan)圍，重新設置(zhi)實(shi)驗方(fang)法(fa)或(huo)者(zhe)在(zai)加(jia)樣前稀(xi)釋(shi)降(jiang)低(di)樣(yang)品(pin)和(he)對(dui)照的(de)濃度‌。

　　11. 滿(man)板(ban)白(bai)，陽性對(dui)照不(bu)顯色

　　可(ke)能原(yuan)因(yin)‌：把(ba)終(zhong)止(zhi)液(ye)誤(wu)當作(zuo)酶(mei)結合物(wu)或(huo)底(di)物(wu)使用(yong)、漏加(jia)或(huo)錯加試劑‌。

　　解(jie)決(jue)方(fang)法(fa)‌：嚴格(ge)按說(shuo)明(ming)書(shu)操(cao)作(zuo)，加液時(shi)看(kan)準標簽(qian)，換用(yong)合(he)格(ge)的(de)蒸(zheng)餾水(shui)或(huo)去(qu)離子(zi)水(shui)‌。

　　12. 滿板(ban)顯色

　　可(ke)能原(yuan)因(yin)‌：讀板(ban)前停(ting)留時間過(guo)長、加(jia)顯色劑後在溫育時受強光(guang)或(huo)紫(zi)外(wai)線(xian)照(zhao)射(she)‌。

　　解(jie)決方(fang)法(fa)‌：加終(zhong)止(zhi)液(ye)後10分鐘(zhong)內(nei)測(ce)定結果(guo)，應(ying)保存在暗(an)處(chu)，避(bi)光(guang)‌。

　　註：以上(shang)僅供(gong)參(can)考(kao)，本(ben)試劑僅供(gong)科(ke)研(yan)使用(yong)，不(bu)作(zuo)為(wei)實(shi)際數(shu)據，實驗需嚴格遵(zun)循(xun)說(shuo)明(ming)或(huo)咨(zi)詢技術老(lao)師。

　　天(tian)津(jin)本生(sheng)壹直(zhi)視(shi)質(zhi)量(liang)控(kong)制為(wei)企(qi)業的(de)生命(ming)，追(zhui)求企(qi)業競(jing)爭力的(de)不(bu)斷提(ti)升(sheng)。公(gong)司在(zai)經(jing)營(ying)中始終(zhong)秉承(cheng)：遵(zun)紀(ji)守法，嚴(yan)於律己(ji)，寬仁(ren)以(yi)待(dai)，敢(gan)於承(cheng)擔(dan)的(de)企(qi)業精(jing)神作為(wei)標準，以過(guo)硬的(de)質(zhi)量(liang)和(he)優(you)良(liang)的(de)服務(wu)來(lai)維(wei)護和(he)拓(tuo)展(zhan)市(shi)場，較大限度的(de)滿足(zu)客(ke)戶(hu)的(de)需求。與客(ke)戶(hu)的(de)共(gong)贏，是(shi)我們的(de)發展(zhan)目(mu)標。本生!您信(xin)任的(de)合作(zuo)夥伴(ban)。我們(men)願與(yu)您真(zhen)誠(cheng)合作(zuo)，共(gong)創(chuang)美(mei)好(hao)的(de)未來(lai)。