植(zhi)物(wu)1,5-二(er)磷酸(suan)核(he)酮糖(tang)羧化酶(mei)(RuBisCO)ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒(he)技術說明書(shu)

　　BS-4938 植物(wu)1,5-二(er)磷(lin)酸(suan)核(he)酮糖(tang)羧化酶(mei)(RuBisCO)ELISA試劑(ji)盒(he) 96T/48T

　　產(chan)品概(gai)述(shu)

　　本試劑(ji)盒(he)用(yong)於體(ti)外(wai)定(ding)量(liang)檢(jian)測植物組(zu)織、細(xi)胞(bao)及(ji)相(xiang)關(guan)液體(ti)樣(yang)本中核(he)酮糖(tang)-1,5-二磷(lin)酸(suan)羧化酶(mei)/加氧酶(mei)(RuBisCO)的活性(xing)。該酶是植(zhi)物光合作用(yong)Calvin循(xun)環(huan)的關(guan)鍵(jian)酶(mei)，其(qi)活性(xing)直(zhi)接(jie)影(ying)響(xiang)光(guang)合速(su)率(lv)和(he)光呼吸過程(cheng)。本試劑(ji)盒(he)采用(yong)雙抗(kang)體(ti)夾心酶聯免(mian)疫吸附(fu)法(ELISA)，具(ju)有高(gao)靈敏(min)度(du)和(he)特(te)異性(xing)。

　　檢(jian)測原(yuan)理

　　試劑(ji)盒(he)采用(yong)雙抗(kang)體(ti)壹(yi)步(bu)夾心法：

　　預(yu)包被抗(kang)RuBisCO單抗(kang)的微(wei)孔板捕獲(huo)樣(yang)本中的目標(biao)酶

　　加入(ru)HRP標(biao)記的檢測抗(kang)體(ti)形(xing)成(cheng)"抗(kang)體(ti)-抗(kang)原(yuan)-酶標(biao)抗(kang)體(ti)"復合物

　　經洗滌後(hou)，加入(ru)TMB顯色(se)底(di)物

　　反應終(zhong)止(zhi)後(hou)，酶標(biao)儀在450nm波(bo)長(chang)測定吸光度(du)(OD值(zhi))

　　樣品中RuBisCO濃(nong)度(du)與(yu)OD值(zhi)呈正(zheng)相(xiang)關(guan)

　　試劑(ji)盒(he)組(zu)成(cheng)

　　組(zu)分(fen) 規(gui)格(ge) 保存(cun)條(tiao)件

　　預包被微(wei)孔板 12×8孔 4℃

　　標(biao)準(zhun)品(6個(ge)濃(nong)度(du)梯(ti)度(du)) 0.3mL×6管(guan) -20℃

　　酶標(biao)抗(kang)體(ti) 15mL 4℃

　　20×洗(xi)滌(di)緩(huan)沖(chong)液 50mL 室溫(wen)

　　TMB顯色(se)液A/B 各(ge)15mL 4℃避(bi)光

　　終(zhong)止(zhi)液 15mL 室溫(wen)

　　樣(yang)本稀(xi)釋液 30mL 4℃

　　樣(yang)本處(chu)理

　　組(zu)織樣(yang)本

　　稱(cheng)取0.1g組(zu)織，加入(ru)1mL提取液冰浴勻(yun)漿(jiang)

　　10,000g 4℃離心10分鐘(zhong)

　　取上(shang)清(qing)液立(li)即(ji)檢(jian)測或-80℃保存(cun)(避(bi)免(mian)反復凍融(rong))

　　細(xi)胞(bao)樣(yang)本

　　收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)沈澱，加入(ru)提取液裂解

　　10,000g 4℃離心10分鐘(zhong)

　　取上(shang)清(qing)液檢(jian)測(ce)

　　血(xue)清(qing)/液體(ti)樣(yang)本

　　室溫(wen)靜置2小(xiao)時或(huo)4℃過夜

　　1,000g離心20分鐘(zhong)

　　取上(shang)清(qing)液檢(jian)測(ce)

　　註(zhu)意事(shi)項‌：

　　避免(mian)樣本溶(rong)血(xue)

　　NaN3會(hui)抑制HRP活(huo)性(xing)，禁(jin)用(yong)含(han)疊(die)氮(dan)鈉樣本

　　新(xin)鮮(xian)樣(yang)本優(you)先，凍存(cun)樣(yang)本避(bi)免(mian)反復凍融(rong)

　　操(cao)作步(bu)驟

　　準(zhun)備試劑(ji)‌：所有(you)試劑(ji)使用(yong)前(qian)平(ping)衡(heng)至室溫(wen)(20-25℃)

　　加樣‌：

　　標(biao)準(zhun)品孔：50μL不同(tong)濃(nong)度(du)標(biao)準(zhun)品

　　樣本孔(kong)：50μL待(dai)測樣(yang)本

　　空白孔(kong)：不加

　　溫(wen)育(yu)‌：每(mei)孔(kong)加入(ru)100μL酶(mei)標(biao)抗(kang)體(ti)，37℃避(bi)光(guang)反(fan)應60分(fen)鐘(zhong)

　　洗滌(di)‌：每孔加350μL洗滌(di)液，靜置1分鐘(zhong)後(hou)甩幹，重(zhong)復5次

　　顯色(se)‌：每(mei)孔加入(ru)50μL底(di)物A和(he)B，37℃避光反(fan)應15分(fen)鐘(zhong)

　　終(zhong)止(zhi)‌：每(mei)孔(kong)加入(ru)50μL終(zhong)止(zhi)液

　　測(ce)定(ding)‌：15分鐘(zhong)內(nei)用(yong)酶(mei)標(biao)儀測定(ding)450nm OD值(zhi)

　　結(jie)果(guo)計(ji)算(suan)

　　以(yi)標(biao)準(zhun)品濃(nong)度(du)為(wei)橫(heng)坐(zuo)標(biao)，OD值(zhi)為(wei)縱坐(zuo)標(biao)繪制標(biao)準(zhun)曲(qu)線

　　根(gen)據樣(yang)本OD值(zhi)在標(biao)準(zhun)曲(qu)線上(shang)查得(de)濃(nong)度(du)

　　樣(yang)本濃(nong)度(du)=測(ce)得(de)濃(nong)度(du)×稀(xi)釋倍數(shu)(如(ru)有)

　　性(xing)能(neng)指標(biao)

　　檢測範圍：18-650 U/L

　　靈敏(min)度(du)：≤5 U/L

　　批(pi)內(nei)變(bian)異系(xi)數(shu)：<10%

　　批(pi)間變異系(xi)數(shu)：<15%

　　註(zhu)意事(shi)項

　　試劑(ji)盒(he)有(you)效(xiao)期6個(ge)月，2-8℃保(bao)存(cun)

　　不同(tong)批號(hao)試劑(ji)不可混用(yong)

　　顯色(se)液避(bi)光(guang)保存(cun)

　　洗(xi)滌(di)不凈(jing)會(hui)導致(zhi)假陽(yang)性(xing)

　　終(zhong)止(zhi)液含(han)腐(fu)蝕(shi)性(xing)物(wu)質(zhi)，操(cao)作時(shi)需(xu)防護(hu)

　　所有(you)廢(fei)棄(qi)物按生(sheng)物危(wei)害(hai)物處(chu)理

　　所需(xu)儀器

　　酶(mei)標(biao)儀(450nm濾光(guang)片)

　　精(jing)密(mi)移液器(qi)(0.5-1000μL)

　　37℃恒(heng)溫(wen)箱(xiang)

　　洗(xi)板機(可選(xuan))

　　渦(wo)旋混合器(qi)

　　註(zhu)：供(gong)科(ke)研使用(yong)，以(yi)上(shang)資(zi)料(liao)供(gong)參考(kao)，不作為(wei)實驗依(yi)據，具(ju)體(ti)請(qing)咨(zi)詢技術老師是或(huo)品牌商。

　　本生(sheng)壹直(zhi)視質(zhi)量控(kong)制為(wei)企業(ye)的生(sheng)命，追(zhui)求企業(ye)競爭力的不斷提升(sheng)。公(gong)司在經營中始終(zhong)秉(bing)承(cheng)：遵紀(ji)守(shou)法，嚴於律(lv)己，寬仁(ren)以(yi)待，敢(gan)於承(cheng)擔(dan)的企業(ye)精(jing)神作為(wei)標(biao)準(zhun)，以(yi)過硬的質(zhi)量和(he)優(you)良(liang)的服(fu)務(wu)來維護(hu)和(he)拓展市場，較大限(xian)度(du)的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我(wo)們(men)的發(fa)展(zhan)目標(biao)。