人胎盤(pan)生長(chang)因(yin)子(zi)(PLGF)酶聯(lian)免(mian)疫(yi)分(fen)析(xi)試(shi)劑盒

　　僅(jin)供(gong)研究(jiu)使用(yong)。

　　檢測(ce)範(fan)圍： 96T3 ng/L -120 ng/L

　　使用(yong)目的(de)：本(ben)試(shi)劑盒用(yong)於測(ce)定(ding)人血清,血(xue)漿及(ji)相(xiang)關液體樣本(ben)中(zhong)胎(tai)盤(pan)生長(chang)因(yin)子(zi)(PLGF)含量。實驗(yan)原(yuan)理本(ben)試(shi)劑盒應用(yong)雙抗(kang)體夾心(xin)法(fa)測(ce)定(ding)標(biao)本中人(ren)胎盤(pan)生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)(PLGF)水(shui)平。用(yong)純化(hua)的(de)人(ren)胎盤生長(chang)因(yin)子(zi)(PLGF)抗體包被微(wei)孔(kong)板，制(zhi)成(cheng)固相抗體，往包被單(dan)抗的(de)微(wei)孔(kong)中依次加(jia)入(ru)胎(tai)盤(pan)生(sheng)長因(yin)子(zi)(PLGF)，再(zai)與HRP標(biao)記的(de)胎(tai)盤生長因(yin)子(zi)(PLGF)抗體結(jie)合，形成(cheng)抗(kang)體-抗原(yuan)-酶標(biao)抗體復合物，經過(guo)洗滌後(hou)加(jia)底(di)物(wu)TMB顯(xian)色(se)。TMB在(zai)HRP酶的(de)催(cui)化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成藍(lan)色(se)，並在(zai)酸的(de)作(zuo)用(yong)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成最(zui)終的(de)黃(huang)色(se)。顏色(se)的(de)深(shen)淺和樣品(pin)中(zhong)的(de)胎(tai)盤生長因(yin)子(zi)(PLGF)呈正(zheng)相關。用(yong)酶標(biao)儀(yi)在(zai)450nm波長(chang)下(xia)測(ce)定(ding)吸(xi)光(guang)度(OD值(zhi))，通過(guo)標(biao)準曲線(xian)計(ji)算樣品(pin)中(zhong)人(ren)胎(tai)盤生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)(PLGF)濃(nong)度。

　　試(shi)劑盒組成(cheng)

　　130倍(bei)濃(nong)縮洗滌液20ml×1瓶(ping)7終(zhong)止(zhi)液

　　6ml×1瓶(ping)2酶標(biao)試(shi)劑

　　6ml×1瓶(ping)8標(biao)準品(1600μg/mL)

　　0.5ml×1瓶(ping)3酶標(biao)包被板(ban)12孔×8條(tiao)9標(biao)準品稀(xi)釋液

　　1.5ml×1瓶(ping)4樣品(pin)稀(xi)釋液

　　6ml×1瓶(ping)10說(shuo)明(ming)書(shu)1份(fen)5顯色(se)劑A液

　　6ml×1瓶(ping)11封(feng)板(ban)膜(mo)2張 6顯(xian)色(se)劑B液

　　6ml×1/瓶(ping)12密(mi)封(feng)袋(dai)1個

　　標(biao)本要求

　　1.標(biao)本采集(ji)後盡(jin)早(zao)進行提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按相(xiang)關文(wen)獻進行，提(ti)取(qu)後應盡(jin)s快(kuai)進行實驗(yan)。若(ruo)不(bu)能(neng)馬(ma)上進行試(shi)驗(yan)，可(ke)將標(biao)本放於-20℃保(bao)存(cun)，但應避免反復凍(dong)融(rong)

　　2.不(bu)能(neng)檢測(ce)含(han)NaN3的(de)樣品(pin)，因(yin)NaN3抑(yi)制(zhi)辣(la)根過(guo)氧化(hua)物酶的(de)(HRP)活性。

　　操作(zuo)步驟(zhou)

　　1.標(biao)準品的(de)稀(xi)釋：本試(shi)劑盒提(ti)供(gong)原(yuan)倍(bei)標(biao)準品壹(yi)支，用(yong)戶可(ke)按照(zhao)下(xia)列(lie)圖表(biao)在(zai)小試(shi)管(guan)中(zhong)進行稀(xi)釋。800μg/mL5號標(biao)準品150μl的(de)原(yuan)倍(bei)標(biao)準品加(jia)入(ru)150μl標(biao)準品稀(xi)釋液400μg/mL4號(hao)標(biao)準品150μl的(de)5號(hao)標(biao)準品加(jia)入(ru)150μl標(biao)準品稀(xi)釋液200μg/mL3號(hao)標(biao)準品150μl的(de)4號(hao)標(biao)準品加(jia)入(ru)150μl標(biao)準品稀(xi)釋液100μg/mL2號(hao)標(biao)準品150μl的(de)3號(hao)標(biao)準品加(jia)入(ru)150μl標(biao)準品稀(xi)釋液50μg/mL1號(hao)標(biao)準品150μl的(de)2號(hao)標(biao)準品加(jia)入(ru)150μl標(biao)準品稀(xi)釋液

　　2.加(jia)樣：分(fen)別(bie)設(she)空(kong)白(bai)孔(kong)(空(kong)白(bai)對(dui)照(zhao)孔(kong)不(bu)加(jia)樣品(pin)及(ji)酶標(biao)試(shi)劑，其余(yu)各(ge)步操作(zuo)相同(tong))、標(biao)準孔、待(dai)測(ce)樣品(pin)孔(kong)。在(zai)酶標(biao)包被板(ban)上標(biao)準品準確(que)加(jia)樣50μl，待(dai)測(ce)樣品(pin)孔(kong)中(zhong)先(xian)加(jia)樣品(pin)稀(xi)釋液40μl，然(ran)後(hou)再(zai)加(jia)待(dai)測(ce)樣品(pin)10μl(樣品(pin)最(zui)終(zhong)稀(xi)釋度為(wei)5倍(bei))。加(jia)樣將(jiang)樣品(pin)加(jia)於酶標(biao)板孔底(di)部(bu)，盡(jin)量不(bu)觸及(ji)孔(kong)壁(bi)，輕輕(qing)晃(huang)動混勻(yun)。

　　3.溫育(yu)：用(yong)封(feng)板(ban)膜(mo)封(feng)板(ban)後(hou)置(zhi)37℃溫(wen)育30分(fen)鐘(zhong)。

　　4.配(pei)液：將(jiang)30倍(bei)濃(nong)縮洗滌液用(yong)蒸餾(liu)水(shui)30倍(bei)稀(xi)釋後備(bei)用(yong)

　　5.洗滌：小心揭(jie)掉(diao)封(feng)板(ban)膜(mo)，棄去(qu)液體，甩(shuai)幹，每孔加(jia)滿(man)洗滌液，靜(jing)置30秒(miao)後棄去(qu)，如(ru)此(ci)重復5次，拍(pai)幹。

　　6.加(jia)酶：每孔加(jia)入(ru)酶標(biao)試(shi)劑50μl，空(kong)白(bai)孔(kong)除(chu)外(wai)。

　　7.溫育：操作(zuo)同3。

　　8.洗滌：操(cao)作(zuo)同5。

　　9.顯(xian)色(se)：每孔先(xian)加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑A50μl，再(zai)加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩(dang)混勻(yun)，37℃避光(guang)顯色(se)10分(fen)鐘(zhong).

　　10.終止(zhi)：每孔加(jia)終(zhong)止(zhi)液50μl，終(zhong)止反應(此(ci)時藍(lan)色(se)立轉(zhuan)黃(huang)色(se))。

　　11.測(ce)定(ding)：以空(kong)白(bai)孔(kong)調(tiao)零(ling)，450nm波長(chang)依序測(ce)量各(ge)孔(kong)的(de)吸(xi)光(guang)度(OD值(zhi))。 測(ce)定(ding)應在(zai)加(jia)終(zhong)止(zhi)液後(hou)15分(fen)鐘(zhong)以內進行。

　　操作(zuo)程(cheng)序總(zong)結(jie)：

　　計(ji)算 以標(biao)準物的(de)濃(nong)度為(wei)橫(heng)坐標(biao)，OD值(zhi)為(wei)縱(zong)坐標(biao)，在(zai)坐標(biao)紙(zhi)上繪出(chu)標(biao)準曲線(xian)，根(gen)據樣品(pin)的(de)OD值(zhi)由標(biao)準曲線(xian)查(zha)出(chu)相(xiang)應的(de)濃(nong)度;再(zai)乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數;或用(yong)標(biao)準物的(de)濃(nong)度與(yu)OD值(zhi)計(ji)算出(chu)標(biao)準曲線(xian)的(de)直(zhi)線(xian)回(hui)歸方程(cheng)式，將(jiang)樣品(pin)的(de)OD值(zhi)代(dai)入(ru)方程(cheng)式，計(ji)算出(chu)樣品(pin)濃(nong)度，再(zai)乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數，即(ji)為(wei)樣品(pin)的(de)實(shi)際(ji)濃(nong)度。

　　人(ren)胎(tai)盤(pan)生長因(yin)子(zi)(PLGF)酶聯(lian)免(mian)疫(yi)分(fen)析(xi)試(shi)劑盒 註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)

　　1.試(shi)劑盒從冷藏(zang)環境中取(qu)出(chu)應在(zai)室溫(wen)平衡15-30分(fen)鐘(zhong)後方可使用(yong)，酶標(biao)包被板(ban)開封(feng)後(hou)如(ru)未用(yong)完，板(ban)條(tiao)應裝入密封(feng)袋(dai)中(zhong)保(bao)存(cun)。

　　2.濃(nong)洗滌液可(ke)能(neng)會有(you)結(jie)晶析(xi)出(chu)，稀(xi)釋時可(ke)在(zai)水(shui)浴中加(jia)溫(wen)助(zhu)溶，洗滌時(shi)不(bu)影響(xiang)結(jie)果。

　　3.各(ge)步加(jia)樣均(jun)應使用(yong)加(jia)樣器，並經常(chang)校(xiao)對(dui)其準確(que)性，以避免試(shi)驗(yan)誤(wu)差(cha)。壹(yi)次加(jia)樣時(shi)間(jian)最(zui)好控(kong)制(zhi)在(zai)5分(fen)鐘(zhong)內，如標(biao)本數量多，推(tui)薦(jian)使用(yong)排槍加(jia)樣。

　　4.請(qing)每次測(ce)定(ding)的(de)同(tong)時做標(biao)準曲線(xian)，最(zui)好做(zuo)復(fu)孔。如(ru)標(biao)本中待(dai)測(ce)物(wu)質含量過(guo)高(gao)(樣本(ben)OD值(zhi)大於標(biao)準品孔(kong)第(di)壹孔的(de)OD值(zhi))，請(qing)先(xian)用(yong)樣品(pin)稀(xi)釋液稀(xi)釋壹定(ding)倍(bei)數(n倍(bei))後(hou)再(zai)測(ce)定(ding)，計(ji)算時請(qing)最(zui)後(hou)乘(cheng)以(yi)總稀(xi)釋倍(bei)數(×n×5)。

　　5.封(feng)板(ban)膜(mo)只(zhi)限(xian)壹(yi)次性使用(yong)，以避免交叉(cha)汙染(ran)。

　　6.底物請(qing)避光(guang)保(bao)存(cun)。

　　7.嚴格按照(zhao)說(shuo)明書(shu)的(de)操(cao)作(zuo)進行，試(shi)驗(yan)結(jie)果判定(ding)必(bi)須(xu)以(yi)酶標(biao)儀(yi)讀(du)數為(wei)準.

　　8.所有(you)樣品(pin)，洗滌液和各(ge)種廢(fei)棄物都應按傳染物(wu)處(chu)理(li)。

　　9.本試(shi)劑不(bu)同批號組分(fen)不(bu)得混用(yong)。

　　保(bao)存(cun)條(tiao)件及(ji)有(you)效(xiao)期(qi)1.試(shi)劑盒保(bao)存(cun)：2-8℃。2.

　　有(you)效期：6個月