人(ren)硝基還(hai)原酶(mei)酶(mei)聯免疫分析試劑(ji)盒 本(ben)生(sheng)ELISA

　　本(ben)試劑(ji)盒僅供(gong)研(yan)究(jiu)使用(yong)。

　　檢(jian)測範(fan)圍(wei)：96T3ng/L-180ng/L

　　使用(yong)目(mu)的(de)：本(ben)試劑(ji)盒用(yong)於測定人(ren)血(xue)清、血(xue)漿及相(xiang)關液(ye)體樣本(ben)中(zhong)硝(xiao)基還(hai)原酶(mei)含(han)量(liang)。實(shi)驗(yan)原理(li)本(ben)試劑(ji)盒應用(yong)雙(shuang)抗體(ti)夾(jia)心法測定標本(ben)中(zhong)人(ren)硝基還(hai)原酶(mei)水平。用(yong)純(chun)化的(de)人(ren)硝基還(hai)原酶(mei)抗體包被微(wei)孔板，制成(cheng)固相(xiang)抗體(ti)，往包被單抗(kang)的(de)微(wei)孔中(zhong)依(yi)次(ci)加(jia)入硝基還(hai)原酶(mei)，再與HRP標(biao)記的(de)硝(xiao)基還(hai)原酶(mei)抗體結合，形(xing)成(cheng)抗(kang)體(ti)-抗(kang)原-酶(mei)標抗體(ti)復(fu)合物，經(jing)過(guo)洗(xi)滌(di)後(hou)加底物TMB顯色。TMB在(zai)HRP酶(mei)的(de)催化下(xia)轉(zhuan)化(hua)成(cheng)藍色，並(bing)在(zai)酸的(de)作(zuo)用(yong)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成(cheng)最終(zhong)的(de)黃(huang)色(se)。顏色的(de)深(shen)淺(qian)和樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)硝(xiao)基還(hai)原酶(mei)呈正相(xiang)關。用(yong)酶(mei)標儀(yi)在(zai)450nm波長(chang)下(xia)測定吸(xi)光(guang)度(OD值)，通(tong)過標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)計(ji)算樣品中(zhong)人(ren)硝基還(hai)原酶(mei)濃度。

　　試劑(ji)盒組成(cheng)

　　130倍濃縮(suo)洗(xi)滌(di)液(ye)20ml×1瓶7終(zhong)止液(ye)

　　6ml×1瓶2酶(mei)標試劑(ji)

　　6ml×1瓶8標(biao)準品(1600μg/mL)

　　0.5ml×1瓶3酶(mei)標包被板12孔×8條(tiao)9標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)

　　1.5ml×1瓶4樣品稀(xi)釋(shi)液(ye)

　　6ml×1瓶10說(shuo)明(ming)書1份5顯色(se)劑(ji)A液(ye)

　　6ml×1瓶11封板膜(mo)2張(zhang) 6顯(xian)色(se)劑(ji)B液(ye)

　　6ml×1/瓶12密封袋(dai)1個(ge)

　　標(biao)本(ben)要求(qiu)

　　1.標(biao)本(ben)采集後(hou)盡早(zao)進(jin)行提取，提取按相(xiang)關文獻進(jin)行(xing)，提取後(hou)應盡s快進行(xing)實(shi)驗(yan)。若不(bu)能(neng)馬上(shang)進行試驗(yan)，可將標本(ben)放於-20℃保(bao)存，但(dan)應避免反復(fu)凍融(rong)

　　2.不(bu)能(neng)檢(jian)測含(han)NaN3的(de)樣(yang)品(pin)，因(yin)NaN3抑制辣根過氧化物(wu)酶(mei)的(de)(HRP)活性。

　　操(cao)作步(bu)驟(zhou)

　　1.標(biao)準品的(de)稀(xi)釋(shi)：本(ben)試劑(ji)盒提供(gong)原倍標準(zhun)品壹支，用(yong)戶可按照(zhao)下(xia)列圖表在(zai)小(xiao)試管(guan)中(zhong)進(jin)行(xing)稀(xi)釋(shi)。800μg/mL5號標(biao)準品(pin)150μl的(de)原倍標準(zhun)品加(jia)入150μl標準品稀(xi)釋(shi)液(ye)400μg/mL4號標準品(pin)150μl的(de)5號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)加入150μl標準品稀(xi)釋(shi)液(ye)200μg/mL3號標準品(pin)150μl的(de)4號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)加入150μl標準品稀(xi)釋(shi)液(ye)100μg/mL2號標準品(pin)150μl的(de)3號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)加入150μl標準品稀(xi)釋(shi)液(ye)50μg/mL1號標準品(pin)150μl的(de)2號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)加入150μl標準品稀(xi)釋(shi)液(ye)

　　2.加樣：分別(bie)設(she)空白(bai)孔(kong)(空白(bai)對(dui)照孔(kong)不(bu)加(jia)樣(yang)品(pin)及酶(mei)標試劑(ji)，其(qi)余(yu)各步(bu)操作相(xiang)同(tong))、標(biao)準孔(kong)、待測樣(yang)品(pin)孔。在(zai)酶(mei)標包被板上標(biao)準(zhun)品準確(que)加樣(yang)50μl，待測樣(yang)品(pin)孔中(zhong)先(xian)加樣(yang)品稀(xi)釋(shi)液(ye)40μl，然(ran)後(hou)再加(jia)待測樣(yang)品(pin)10μl(樣品最終(zhong)稀(xi)釋(shi)度為(wei)5倍)。加樣(yang)將樣品(pin)加於(yu)酶(mei)標板孔底部，盡量不(bu)觸(chu)及孔壁(bi)，輕輕晃動混(hun)勻。

　　3.溫(wen)育(yu)：用(yong)封板膜(mo)封板後(hou)置37℃溫育(yu)30分鐘。

　　4.配(pei)液(ye)：將30倍濃縮(suo)洗(xi)滌(di)液(ye)用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水30倍稀(xi)釋(shi)後(hou)備用(yong)

　　5.洗(xi)滌(di)：小心揭掉(diao)封板膜(mo)，棄(qi)去(qu)液(ye)體，甩幹，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌(di)液(ye)，靜置30秒後(hou)棄(qi)去(qu)，如此(ci)重(zhong)復(fu)5次，拍(pai)幹(gan)。

　　6.加酶(mei)：每(mei)孔(kong)加(jia)入酶(mei)標試劑(ji)50μl，空白(bai)孔(kong)除外(wai)。

　　7.溫育(yu)：操作(zuo)同(tong)3。

　　8.洗(xi)滌(di)：操作同(tong)5。

　　9.顯(xian)色：每(mei)孔(kong)先(xian)加入顯色劑(ji)A50μl，再加(jia)入顯色劑(ji)B50μl，輕輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，37℃避光(guang)顯色(se)10分鐘.

　　10.終(zhong)止：每(mei)孔(kong)加(jia)終(zhong)止液(ye)50μl，終(zhong)止反(fan)應(此時藍色立轉(zhuan)黃(huang)色(se))。

　　11.測定：以空白(bai)孔(kong)調零，450nm波長(chang)依(yi)序(xu)測量(liang)各孔(kong)的(de)吸(xi)光(guang)度(OD值)。 測定應在(zai)加(jia)終(zhong)止液(ye)後(hou)15分鐘以(yi)內(nei)進(jin)行。

　　操作程(cheng)序(xu)總結：

　　計算(suan) 以(yi)標準物(wu)的(de)濃(nong)度(du)為(wei)橫(heng)坐標，OD值為(wei)縱(zong)坐標(biao)，在(zai)坐(zuo)標(biao)紙(zhi)上(shang)繪(hui)出標準(zhun)曲線(xian)，根(gen)據樣(yang)品的(de)OD值由標準(zhun)曲線(xian)查(zha)出相(xiang)應的(de)濃(nong)度(du);再(zai)乘(cheng)以稀(xi)釋(shi)倍數(shu);或(huo)用(yong)標準物(wu)的(de)濃(nong)度(du)與(yu)OD值計(ji)算出標準(zhun)曲線(xian)的(de)直(zhi)線(xian)回歸方程(cheng)式，將樣品(pin)的(de)OD值代入方程(cheng)式，計(ji)算(suan)出樣品(pin)濃度，再乘(cheng)以稀(xi)釋(shi)倍數(shu)，即為樣品(pin)的(de)實(shi)際(ji)濃度(du)。

　　人(ren)硝基還(hai)原酶(mei)酶(mei)聯免疫分析試劑(ji)盒 本(ben)生(sheng)ELISA 註(zhu)意事(shi)項(xiang)

　　1.試劑(ji)盒從(cong)冷藏(zang)環境(jing)中(zhong)取出應在(zai)室(shi)溫(wen)平(ping)衡(heng)15-30分鐘後(hou)方可使用(yong)，酶(mei)標包被板開封(feng)後(hou)如未(wei)用(yong)完(wan)，板條(tiao)應裝入密封袋中(zhong)保(bao)存。

　　2.濃洗(xi)滌(di)液(ye)可能(neng)會有(you)結晶析(xi)出，稀(xi)釋(shi)時可在(zai)水(shui)浴中(zhong)加(jia)溫(wen)助(zhu)溶，洗(xi)滌(di)時不(bu)影(ying)響結果(guo)。

　　3.各步(bu)加樣均應使用(yong)加樣器(qi)，並(bing)經(jing)常(chang)校(xiao)對其(qi)準(zhun)確性，以(yi)避免試驗(yan)誤(wu)差。壹次加(jia)樣(yang)時間(jian)最好控(kong)制(zhi)在(zai)5分鐘內(nei)，如(ru)標本(ben)數(shu)量(liang)多，推薦使(shi)用(yong)排槍加(jia)樣(yang)。

　　4.請(qing)每(mei)次(ci)測定的(de)同(tong)時(shi)做標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)，最好做(zuo)復(fu)孔。如(ru)標(biao)本(ben)中(zhong)待測物(wu)質(zhi)含(han)量(liang)過(guo)高(gao)(樣(yang)本(ben)OD值大(da)於標(biao)準(zhun)品(pin)孔第壹孔的(de)OD值)，請(qing)先(xian)用(yong)樣品稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)壹定倍數(shu)(n倍)後(hou)再測定，計算(suan)時請最後(hou)乘(cheng)以總(zong)稀(xi)釋(shi)倍數(shu)(×n×5)。

　　5.封(feng)板膜(mo)只限(xian)壹次性使(shi)用(yong)，以避免交叉(cha)汙(wu)染(ran)。

　　6.底物請避光(guang)保(bao)存。

　　7.嚴格(ge)按照(zhao)說(shuo)明(ming)書的(de)操(cao)作(zuo)進(jin)行(xing)，試驗(yan)結果(guo)判定必須(xu)以酶(mei)標儀(yi)讀(du)數(shu)為(wei)準(zhun).

　　8.所有樣(yang)品，洗(xi)滌(di)液(ye)和各種(zhong)廢棄(qi)物都應按傳(chuan)染(ran)物處(chu)理(li)。

　　9.本(ben)試劑(ji)不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)組(zu)分不(bu)得(de)混(hun)用(yong)。

　　保(bao)存條(tiao)件及有效(xiao)期(qi)1.試劑(ji)盒保(bao)存：2-8℃。2.

　　有效(xiao)期(qi)：6個月(yue)