ELISA檢測(ce)試劑盒(he)如(ru)何(he)避免(mian)假(jia)陽性(xing)現象及(ji)實(shi)驗關(guan)鍵(jian)點

　　1、加(jia)樣

　　對於間(jian)接進口(kou)ELISA檢(jian)測(ce)試劑盒(he)標(biao)本壹(yi)般(ban)都要進行稀(xi)釋(shi)，如(ru)果(guo)加(jia)樣不(bu)準就(jiu)會(hui)造(zao)成誤差，尤(you)其(qi)當稀(xi)釋(shi)倍(bei)數大(da)時，很(hen)小的絕對誤(wu)差，會導致較(jiao)大(da)的相對誤(wu)差，使(shi)陰性(xing)(或弱(ruo)陽性(xing))標(biao)本呈(cheng)陽(yang)性(xing)(或陰性(xing))。加(jia)樣時應將(jiang)所加(jia)物(wu)加(jia)在ELISA板(ban)孔的底部(bu)，避免(mian)加(jia)在孔壁(bi)上部(bu)，並(bing)註(zhu)意不(bu)可濺出，不(bu)可產生(sheng)氣泡(pao)。目(mu)前，大(da)部(bu)分血(xue)站(zhan)都已使(shi)用全(quan)自(zi)動(dong)酶免(mian)加(jia)樣系統(tong)處(chu)理標(biao)本，可(ke)較(jiao)好(hao)地避免(mian)以(yi)上誤差。

　　2、洗(xi)滌(di)

　　在進口(kou)ELISA檢(jian)測(ce)試劑盒(he)中正(zheng)確(que)的洗(xi)滌(di)是保證(zheng)得(de)到(dao)可(ke)重(zhong)復結果(guo)的關(guan)健壹(yi)步，應引起(qi)操作(zuo)者重(zhong)視(shi)。無論是手(shou)工操作(zuo)還(hai)是機器(qi)操作(zuo)，得(de)出(chu)不(bu)正確(que)的結(jie)果(guo)常與(yu)不(bu)正確(que)的洗(xi)滌(di)有(you)關(guan)，ELISA就是靠洗(xi)滌(di)來(lai)達(da)到(dao)分離遊(you)離和(he)結合的酶(mei)標(biao)記(ji)物(wu)的目(mu)的。通(tong)過(guo)洗(xi)滌(di)以(yi)消(xiao)除(chu)殘(can)留(liu)在板(ban)孔中沒能與(yu)固(gu)體抗(kang)原或抗(kang)體(ti)結合的物(wu)質，以及(ji)在反(fan)應過程中非(fei)特異(yi)性(xing)吸(xi)附(fu)於固(gu)相載體的幹(gan)擾(rao)物(wu)質。

　　3、 溫育(yu)

　　每種試劑都有(you)其(qi)*合適(shi)的反(fan)應模(mo)式，其(qi)中溫(wen)度和(he)溫育時間(jian)控制(zhi)是重要因素(su)。因孵(fu)育溫(wen)度(du)高(gao)，反(fan)應時間(jian)長，會(hui)造成整板(ban)本底高(gao)，陽(yang)性(xing)率高(gao)。溫育壹般(ban)用(yong)濕(shi)盒(he)或水(shui)浴(yu)，反(fan)應板(ban)不(bu)宜疊(die)放(fang)，以保證(zheng)各(ge)板(ban)溫(wen)度(du)都能迅(xun)速平(ping)衡，為避免(mian)蒸(zheng)發(fa)，板(ban)上應加(jia)蓋(gai)。

　　4、酶(mei)標(biao)儀(yi)判讀(du)

　　作為記(ji)錄測(ce)定結(jie)果(guo)的儀(yi)器(qi)，酶(mei)標(biao)儀(yi)的性(xing)能穩(wen)定與(yu)否，決定結果(guo)的可(ke)靠(kao)度(du)。首(shou)先(xian)酶(mei)標(biao)儀(yi)應定期進行保養(yang)，對(dui)濾光片(pian)要定期(qi)校(xiao)正;其(qi)次酶標(biao)儀(yi)波長(chang)設置(zhi)要正確(que)，使(shi)用雙(shuang)波(bo)長(chang)，壹個檢(jian)測(ce)波長(chang)，壹個參比(bi)波長(chang)，以消(xiao)除(chu)微孔板(ban)底部(bu)劃(hua)痕、不(bu)平、指印(yin)或(huo)液面高(gao)度(du)差異造成的光幹擾(rao)。此(ci)外，在用酶標(biao)儀(yi)讀(du)數時(shi)先(xian)擦(ca)試微孔板(ban)底部(bu)並(bing)壓(ya)平板(ban)條(tiao)。由於各(ge)種酶標(biao)儀(yi)性(xing)能有(you)所(suo)不(bu)同，使(shi)用中應詳細閱讀(du)說明書(shu)

　　由於酶(mei)聯免(mian)疫吸(xi)附(fu)技術(shu)目(mu)前在技術上缺(que)乏標(biao)準化(hua)，盡管(guan)目(mu)前國際上以及(ji)我國有(you)了(le)部(bu)分標(biao)準血(xue)清或(huo)參比(bi)血(xue)清(血(xue)清盤(pan))。但(dan)由(you)於受方法學(xue)及(ji)技術(shu)條(tiao)件的限(xian)制(zhi)，在酶聯吸(xi)附(fu)測(ce)定中有(you)時(shi)不(bu)可避免(mian)的會(hui)出(chu)現壹(yi)定(ding)的非(fei)特異(yi)性(xing)，但(dan)我(wo)們可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)以上措施(shi)把(ba)非特異(yi)性(xing)顯色降(jiang)至限底，從(cong)而提(ti)高(gao)檢測(ce)的特異(yi)性(xing)，並得(de)到(dao)更(geng)準確(que)、可靠的實(shi)驗結(jie)果(guo)。

　　ELISA實(shi)驗的基(ji)礎是抗(kang)原或抗(kang)體(ti)的固(gu)相化(hua)及(ji)抗(kang)原或抗(kang)體(ti)的酶(mei)標(biao)記(ji)，其(qi)中，結(jie)合在固(gu)相載體表(biao)面的抗(kang)原或抗(kang)體(ti)仍保持其免(mian)疫學(xue)活(huo)性(xing)，酶標(biao)記(ji)的抗(kang)原或抗(kang)體(ti)既(ji)保留(liu)其免(mian)疫學(xue)活(huo)性(xing)，又保留(liu)酶的活(huo)性(xing)。進行檢測(ce)時，樣品中的受檢物(wu)質(抗(kang)原或抗(kang)體(ti))與(yu)固(gu)定的抗(kang)體(ti)或抗(kang)原結合。通過洗(xi)板(ban)除(chu)去非結合物(wu)，再(zai)加(jia)入(ru)酶(mei)標(biao)記(ji)的抗(kang)原或抗(kang)體(ti)，此時，能固(gu)定下來(lai)的酶(mei)量與(yu)樣品中被檢物(wu)質的量相關(guan)。通過(guo)加(jia)入(ru)與(yu)酶反(fan)應的底物(wu)後(hou)顯色，根(gen)據顏(yan)色(se)的深(shen)淺(qian)可以(yi)判斷樣品中物(wu)質的含(han)量，進行定性(xing)或定(ding)量的分析。由(you)於酶(mei)的催化(hua)效率(lv)很高(gao)，間(jian)接地放(fang)大(da)了免(mian)疫反(fan)應的結(jie)果(guo)，使(shi)測(ce)定方(fang)法達(da)到(dao)很(hen)高(gao)的靈敏度(du)。

　　那麽(me)ELISA試劑盒(he)需(xu)把(ba)握(wo)的關(guan)鍵(jian)有(you)哪(na)些(xie)?

　　1.在儲(chu)存及(ji)孵(fu)育過(guo)程(cheng)中避免(mian)將(jiang)試劑暴(bao)露在強(qiang)光中。壹(yi)切試劑瓶(ping)蓋須(xu)蓋(gai)緊以避免(mian)蒸(zheng)發(fa)和(he)汙(wu)染，試劑避免(mian)受到(dao)微生(sheng)物(wu)的汙(wu)染，因(yin)為蛋白(bai)水(shui)解(jie)酶的幹(gan)擾(rao)將(jiang)導致呈(cheng)現錯(cuo)誤的結(jie)果(guo)。

　　2.小心(xin)汲取試劑並(bing)嚴(yan)格遵守(shou)給定的孵(fu)育時(shi)刻和(he)溫度。請(qing)註(zhu)意在汲取標(biao)本/規(gui)範(fan)品(pin)，酶結合物(wu)或(huo)底物(wu)時(shi)，di壹個孔與(yu)壹個孔加(jia)樣之間(jian)的時(shi)刻距(ju)離假(jia)如(ru)太(tai)大(da)，將(jiang)會導致不(bu)同的 “預(yu)孵(fu)育"時(shi)刻，然後(hou)明(ming)顯地影(ying)響(xiang)到(dao)測(ce)量值(zhi)的準確(que)性(xing)及(ji)重復(fu)性(xing)。

　　3.試劑盒(he)保存：部(bu)分試劑保存於-20℃，部(bu)分試劑保存於2-8℃，具(ju)體以標(biao)簽(qian)上的標(biao)示為準。

　　4.濃(nong)洗(xi)滌(di)液(ye)會(hui)有(you)鹽分出，稀(xi)釋(shi)時(shi)可在水(shui)浴(yu)中加(jia)溫(wen)助溶。

　　5.剛(gang)敞開(kai)的酶(mei)聯板(ban)孔中可(ke)能會(hui)含有(you)少(shao)許(xu)水(shui)樣物(wu)質，此為正常現象，不(bu)會對試驗結(jie)果(guo)造(zao)成任(ren)何(he)影響(xiang)。

　　6.壹(yi)切(qie)的樣品都應管(guan)理好(hao)，依(yi)照規(gui)則的程(cheng)序(xu)處(chu)理樣品和(he)檢測(ce)設備(bei)。

　　ELISA試劑盒(he) 本生(sheng)是實(shi)驗室(shi)本生(sheng)壹直(zhi)視質量控(kong)制為企業的生(sheng)命，追求(qiu)企業競(jing)爭(zheng)力的不(bu)斷提(ti)升(sheng)。公(gong)司在經營中始終(zhong)秉(bing)承：遵紀(ji)守(shou)法，嚴(yan)於律(lv)己，寬(kuan)仁以待(dai)，敢於承擔(dan)的企(qi)業精(jing)神(shen)作為標(biao)準，以(yi)過(guo)硬(ying)的質量和(he)優良(liang)的服(fu)務來(lai)維(wei)護(hu)和(he)拓展(zhan)市場(chang)，較(jiao)大(da)限度(du)的滿(man)足(zu)客戶(hu)的需(xu)求(qiu)。與(yu)客戶(hu)的共(gong)贏(ying)，是我們的發(fa)展(zhan)目(mu)標(biao)。本生(sheng)!您信任(ren)的合作夥伴(ban)。我(wo)們(men)願(yuan)與(yu)您真誠(cheng)合作，共創美(mei)好(hao)的未(wei)來(lai)。